法测pod活性,pod活性测定方法

金生153小时前

gop-pod计算

进行gop-Pod法计算时,首先需要明确活性的计算公式

GOPPOD法计算主要通过系列公式和步骤来确定酶的活性,进而评估血糖水平。以下是进行GOPPOD法计算的关键步骤:明确活性的计算公式:活性 = * 67μl所用酶液中含酶的重量 * 3 / 反应混合物的总体积 ) * 15次平均值。

| (CHOH)4 + O2 + H2O → (CHOH)4 + H2O2 | CH2OH CH2OH 反应过程中,葡萄糖脱下的氢交给FAD,使FAD转化为FAD.2H。接着,FAD.2H与氧作用生成过氧化氢葡萄糖氧化酶在催化葡萄糖氧化反应中,扮演着关键角色

作为受氢体催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸,并产生过氧化氢:CHO COOH| |(CHOH)4 + O2 + H2O → (CHOH)4 + H2O2| |CH2OH CH2OH(葡萄糖)---(葡萄糖酸(CHOH)4)作用时,葡萄糖脱下的氢交给FAD,使之成FAD.2H,然后FAD.2H与氧作用,生成 H2O2。

然而,溶液中约36%为α型葡萄糖,64%为β型。葡萄糖的完全氧化需α型变旋成β型。为促进变旋反应,国外某些商品葡萄糖氧化酶试剂盒含有葡萄糖变旋酶。但在终点法中,延长孵育时间足以完成变旋过程。新配制的葡萄糖标准液主要是α型,因此需放置2小时以上(最好过夜),以达到变旋平衡后方可应用

pod酶活性测定方法

pod酶活性测定方法有定时法、连续监测法、平衡法。定时法 通过测定酶反应开始后某一时间段内(t1到t2)产物或底物浓度的总变化量来求取酶反应初速度的方法。其中t1往往取反应开始的时间。该法最基本的一点是停止反应后才测定底物或物的变化。优点:简单易行,对试剂要求不高。缺点:难保证测定结果的真实性。

POD测定:酶液稀释10倍,取50uL待测液与2mL POD反应液和1mL 0.2mo1/L的磷酸二氢钾溶液反应,用紫外分光光度计于470nm处每隔30sec测其吸光值A470,重复3次求平均值,以△A470/min/gFW表示酶活大小。SOD(超氧化物歧化酶活性)的测定 试剂:① 0.05mol/l磷酸缓冲液(PH值为8)。

.5 g叶片加入50 mmol L-1磷酸缓冲液(pH8,含2%的聚乙烯吡咯烷酮),研磨,4℃ 8000 r/min离心20 min,上清液定容至5 ml。

实验旨在理解过氧化物酶的作用,并掌握愈创木酚法测定果蔬组织中POD活性的详细步骤。POD,即过氧化物酶,是果蔬体内一种关键的氧化还原酶,它与生物过程紧密相连,如生长、发育、抗病、抗氧化等。过氧化物酶催化H2O2氧化酚类物质,产生有色化合物。

果蔬中过氧化物酶活性的测定

1、实验所需材料包括各种果蔬,以及研磨设备、离心机、分光光度计等仪器,以及醋酸缓冲液、愈创木酚、H2O2等试剂。具体制备过程中,需先制备酶液,通过研磨果蔬并离心提取酶提取液,然后进行活性测定,通过在特定波长下测定吸光度变化,计算出每分钟吸光度变化值,以此确定过氧化物酶的活性。

2、在测定过氧化氢酶活力时,我们通常测量反应溶液在特定波长下的吸光度值。随着过氧化氢酶的活性增加,反应溶液的吸光度会随时间而降低。根据吸光度的变化,可以计算出过氧化氢酶的活性单位,通常以每克鲜重(FW)果蔬样品每分钟吸光度变化值增加1时为1个过氧化物酶活性单位(U)。

法测pod活性,pod活性测定方法

3、过氧化物酶属于最耐热的酶类,在果蔬加工中常被当作热处理是否充分的指标

pod测定方法

pod酶活性测定方法有定时法、连续监测法、平衡法。定时法 通过测定酶反应开始后某一时间段内(t1到t2)产物或底物浓度的总变化量来求取酶反应初速度的方法。其中t1往往取反应开始的时间。该法最基本的一点是停止反应后才测定底物或物的变化。优点:简单易行,对试剂要求不高。缺点:难保证测定结果的真实性。

样品测定:取3ml反应液并加入30μl酶液,以PBS为对照调零,而后测定OD470值(测定40秒)。(边加样边测定,测定前等待5秒,动作要快,如果慢的话,要保证每个样品从加好样到开始记时的时间相差不大)(4)酶活性计算:以每min OD值变化(升高)0.01为1个酶活性单位(u)。

POD测定:酶液稀释10倍,取50uL待测液与2mL POD反应液和1mL 0.2mo1/L的磷酸二氢钾溶液反应,用紫外分光光度计于470nm处每隔30sec测其吸光值A470,重复3次求平均值,以△A470/min/gFW表示酶活大小。SOD(超氧化物歧化酶活性)的测定 试剂:① 0.05mol/l磷酸缓冲液(PH值为8)。

采用什么方法可以定量测定酶活性

超氧物歧化酶(SOD)活性测定通常采用氮蓝四唑(NBT)法。首先,准备200μL的粗提液,并加入7mL含712μmol/L氮蓝四唑、100μmol/L EDTA-Na2和137mmol/L甲硫氨酸的50mmol/L pH8的磷酸缓冲液(PBS)。

酶联免疫吸附测定法(ELISA):该方法是通过特异性抗体对酶进行定量分析。在ELISA中,通过将酶标记在抗体上,然后使用底物来测定酶的活性。这种方法具有高灵敏度和特异性。薄层色谱法:该方法是通过比较样品和标准溶液的色谱图来测定酶活性。这种方法可以用来分析和鉴定复杂的生物大分子。

原理差异:速率法基于酶促反应过程中底物或中间产物的变化速率来测定酶活性,而终点法则通过测量反应结束时产物的总量或底物的剩余量来定量酶活性。 操作方式差异:在使用速率法时,需要连续监测反应过程中底物或产物的浓度变化,以获得动力学曲线。

关于过氧化物酶(POD)活性测定(愈创木酚法)

1、过氧化物酶催化H2O2氧化酚类物质,产生有色化合物。在愈创木酚法中,POD催化H2O2将愈创木酚氧化为红棕色的4-邻甲氧基苯酚,其470 nm处有高光吸收,因此可利用比色法测量其活性。实验所需材料包括各种果蔬,以及研磨设备、离心机、分光光度计等仪器,以及醋酸缓冲液、愈创木酚、H2O2等试剂。

2、准确的说是愈创木酚 愈创木酚法测定活性酶定操作 实验目的 过氧化物酶是植物体内普遍存在的、活性较高的一种酶,它与呼吸作用、光合作用及生长素的氧化等都有密切关系,在植物生长发育过程中,它的活性不断发生变化,因此测量这种酶,可以反映某一时期植物体内代谢的变化。

3、B. POD溶液制备:在50mL 100mmol/L pH0的磷酸盐缓冲液中加入19uL愈创木酚,加热搅拌,溶解冷却后加入28uL 30%的H2O2即为POD反应液,放到冰箱保存

4、过氧化物酶属于最耐热的酶类,在果蔬加工中常被当作热处理是否充分的指标。

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